Im Pharma-, Biotech- oder generell im Forschungslabor erweist es sich als praktisch, eine vorgemischte Lösung am Platz zu haben. Diese ist zwecks Vermeidung von Oxidation und wegen der besseren Haltbarkeit vorteilhafterweise mit Puffer überschichtet.
Der Königsweg – vor sensiblen Assays
Die Extraktion mit Phenol liefert hochreine DNA und RNA, ohne eine der beiden Molekülsorten abzureichern oder auf Stranglängen zu selektieren. Die Isolierung der Nukleinsäuren ist damit quantitativ und qualitativ sehr effizient und häufig noch der Königsweg vor Downstream-Prozessen, bei denen sehr sauberere Proben erforderlich sind.
Chloroform und Phenol bewirken eine Denaturierung der in der Probe enthaltenen Proteine. Durch den enthaltenen Isoamylalkohol kann die organische Phase von der wässrigen Phase leicht unterschieden und einfach getrennt werden.
Zudem werden RNasen effizient inhibiert und zugleich das Schäumen verhindert. Der pH-Wert von 7,5 bis 8,0 gewährleistet die quantitative Extraktion sowohl von DNA als auch von RNA, ohne Abreicherung der DNA, wie sie bei sauren pH-Werten erfolgt.
So läuft es in der Praxis
Nach der Zugabe von einem definierten Volumen des Gemischs wird die Probe kräftig durchmischt und zentrifugiert, ehe die obere, nukleinsäurehaltige Phase entnommen und weiter aufgereinigt werden kann. Nach der Extraktion sollte die Nukleinsäure durch ethanolische Fällung mit dem jeweils passenden Salzzusatz aufkonzentriert werden.
Kontakt:
Roth AG
CH-4144 Arlesheim
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